Criometria

Criometria – O que é

A citometria é a medição do número e características das células.

As variáveis que podem ser medidas por métodos citométricos incluem tamanho celular, contagem de células, morfologia celular (forma e estrutura), fase do ciclo celular, conteúdo de DNA e a existência ou ausência de proteínas específicas na superfície celular ou no citoplasma.

A citometria é usada para caracterizar e contar células sanguíneas em exames de sangue comuns, como o hemograma completo.

De maneira semelhante, a citometria também é usada na pesquisa de biologia celular e em diagnósticos médicos para caracterizar células em uma ampla gama de aplicações associadas a doenças como câncer e AIDS

A citometria envolve uma ampla gama de técnicas de ponta, a maioria das quais mede as propriedades moleculares das células empregando marcação fluorescente para detectar antígenos específicos usando anticorpos, íons intracelulares usando corantes indicadores, moléculas repórter fluorescentes como proteína fluorescente verde e DNA e RNA usando sondas específicas de ácido nucleico.

Outros sinais ópticos também podem ser medidos, incluindo dispersão de luz.

As células podem estar vivas ou fixas, dependendo da aplicação, e as células individuais podem ser classificadas fisicamente usando um citômetro.

A citometria desempenhou um papel crucial no avanço das fronteiras da biologia, medicina e tecnologia.

Embora o termo “citometria” possa ser aplicado a qualquer método usado para extrair informações quantitativas de células individuais, os exemplos mais comuns são citometria de fluxo e citometria de imagem, que são principalmente métodos ópticos.

Citometria de fluxo – O que é

Criometria

A citometria de fluxo é geralmente usada para analisar células individuais em uma suspensão e é comum em imunologia e hematopatologia.

As características da citometria de fluxo são a velocidade de análise, a sensibilidade de detecção, a capacidade de medir muitos parâmetros simultaneamente e a capacidade de classificar células individuais.

As tendências recentes na tecnologia de citometria de fluxo incluem espectroscopia de célula única, espectrometria de massa de célula única, geração de imagens de células individuais em fluxo e o desenvolvimento de pequenos citômetros de fluxo e classificadores de baixo custo.

Citometria de fluxo – Definição

A citometria de fluxo é um método de classificação e medição de tipos de células por marcação fluorescente de marcadores na superfície das células.

É por vezes referido como Classificação de células ativadas fluorescentes

Citometria de fluxo – Propósito

A análise de citometria de fluxo é mais frequentemente usada clinicamente para ajudar a determinar o tipo de leucemia ou linfoma que um paciente tem e para avaliar o prognóstico.

A citometria de fluxo é bastante sensível; é capaz de detectar tipos de células raros e níveis residuais de doença.

Citometria de fluxo – Precauções

Drogas, como esteróides, que suprimem o sistema imunológico afetarão o número de glóbulos brancos na amostra do paciente.

Citometria de fluxo – Descrição

O médico selecionará uma amostra com base no tipo de câncer que o paciente acredita ter. No caso de linfoma, a amostra pode ser coletada por punção aspirativa por agulha fina, então a amostra de tecido será separada em células únicas. A análise da leucemia exigirá que o paciente forneça uma amostra de sangue.

A amostra de sangue do paciente será separada e os glóbulos vermelhos removidos. A amostra será misturada com uma variedade de anticorpos diferentes que podem interagir com marcadores na superfície das células.

Diferentes tipos de células têm marcadores característicos em suas superfícies celulares, de modo que um determinado tipo de célula pode ser identificado pelos anticorpos que se ligam a ela.

Os anticorpos são rotulados para que emitam luz fluorescente (brilho) à medida que passam pelo feixe de laser no citômetro.

O citômetro também mede o tamanho da célula e algumas informações sobre o interior da célula. O médico utiliza essas informações para determinar o tipo específico de leucemia, como mielóide ou linfocítica, o que, por sua vez, ajuda a determinar o tipo de tratamento que será mais adequado ao paciente.

A análise da amostra também pode ser realizada usando um tipo mais complexo de citômetro de fluxo combinado com um microscópio, chamado citômetro de varredura a laser.

Este instrumento é semelhante a um citômetro de fluxo normal, mas é mais capaz de analisar amostras de tumores sólidos.

Citometria de fluxo – Preparação

A citometria de fluxo geralmente é realizada em sangue, fluidos corporais ou medula óssea. Na maioria dos casos, nenhuma preparação especial é necessária.

Se a aspiração da medula óssea for necessária ou uma biópsia de um tumor sólido for necessária, o paciente deve ser preparado adequadamente para esses procedimentos. No entanto, a citometria de fluxo em si não requer nenhuma preparação adicional por parte do paciente.

Citometria de fluxo – Cuidados posteriores e riscos

Os únicos cuidados posteriores e riscos associados à análise por citometria de fluxo são aqueles associados ao procedimento de coleta da amostra. A análise celular em si não requer esforço ou risco do paciente.

Resultados normais: Um resultado normal indicará que não há aumento no número de qualquer tipo particular de célula imune. O patologista verá vários tipos diferentes de células, mas nenhum tipo estará presente em maior número.

Citometria de fluxo – Resultados anormais

Se os resultados forem anormais, o patologista observará um número incomumente grande de um tipo de célula em particular.

Os tipos de marcadores presentes na célula darão mais informações sobre o tipo de leucemia ou linfoma e poderão indicar o prognóstico do paciente. Por exemplo, células leucêmicas que possuem marcadores normalmente encontrados em tipos de células menos maduras podem sugerir um prognóstico pior e, portanto, uma terapia mais agressiva pode ser recomendada.

Análise de citometria de fluxo – Definição

A análise de citometria de fluxo é a classificação de populações de células com base na análise de dispersão de luz e fluorescência facilitada por um laser.

As células são contadas e analisadas à medida que passam individualmente pela área de contagem criada por uma bainha líquida que flui pelo laser. As células espalham a luz do laser; a dispersão direta e em ângulo reto são medidas para determinar o tamanho e a granularidade. Este gráfico de dispersão de luz inicial (dot plot) é usado para selecionar uma população de células específica para teste usando anticorpos específicos ligados covalentemente a corantes fluorescentes. O laser excita o fluorocromo fazendo com que ele emita luz visível, para que as células ligadas ao corante possam ser detectadas.

Análise de citometria de fluxo – Propósito

Princípios de citometria de fluxo são incorporados em alguns analisadores hematológicos automatizados para determinar a contagem de reticulócitos (estágio que precede um glóbulo vermelho maduro) e a porcentagem de cada tipo de glóbulo branco (contagem diferencial automatizada). Citômetros de fluxo são instrumentos especializados que podem medir subpopulações de células específicas no sangue, aspirados de medula óssea, fluidos corporais e tecidos.

A citometria de fluxo tem muitas aplicações, incluindo:

Contagem de subpopulações de linfócitos para avaliação da função imunológica e estados de imunodeficiência. O número de linfócitos B, T e NK pode ser contado por citometria de fluxo para avaliar o estado imunológico celular de uma pessoa.

As células T auxiliares e supressoras podem ser contadas para auxiliar no diagnóstico e estadiamento de pessoas com doença por HIV.

Contagem de glóbulos brancos imaturos (blastos) para determinar a linhagem celular. A linhagem celular deve ser definida para classificar adequadamente as leucemias agudas e crônicas e os linfomas não Hodgkin.

Testes de citometria de fluxo para marcadores de superfície em glóbulos brancos precoces para determinar a linhagem celular (linfóide vs mielóide) e para determinar o estágio de maturação celular.

Determinar o conteúdo de DNA das células. As células malignas geralmente possuem um teor de DNA anormalmente alto. A determinação do conteúdo de DNA, chamada de análise de ploidia, é usada para investigar populações de células tumorais. As células de tecidos sólidos (por exemplo, tecido mamário) podem ser transformadas em suspensão e analisadas.

Classificando fisicamente as subpopulações de células aplicando uma carga eletrostática às células e usando um dispositivo de coleta de fluido para colhê-las de gotículas que passam pela câmara de fluxo.

Avaliação de trombocitopenia autoimune, rejeição de transplante e doenças autoimunes.

Análise de citometria de fluxo – Precauções

Precauções universais para a prevenção da transmissão de patógenos transmitidos pelo sangue são observadas ao coletar e processar sangue, medula óssea, fluidos corporais e tecidos para análise de citometria de fluxo. Amostras de sangue ou aspirado de medula óssea podem ser submetidas em heparina sódica (tubo superior verde), EDTA (tubo superior lavanda) ou ACD (tubo superior amarelo). Destes, o anticoagulante preferido é a heparina sódica. A heparina de lítio e outros anticoagulantes não são usados.

Linfonodos ou outros espécimes de tecido não são colocados no fixador. Devem ser apresentados frescos, em solução salina isotônica ou meio de transporte.

As amostras devem ser mantidas à temperatura ambiente se a análise for feita dentro de 24 horas. Caso contrário, a amostra deve ser refrigerada, mas não congelada.

Análise de citometria de fluxo – Descrição

Um citômetro de fluxo consiste em uma fonte de luz laser, câmara de medição de fluxo e um sistema óptico que consiste em lentes, filtros e detectores de luz. Dois tubos fotomultiplicadores (detectores de luz), um a 180 graus e outro a 90 graus do laser, são usados para medir a dispersão direta e em ângulo reto, respectivamente. Três detectores de fluorescência, cada um consistindo de um filtro e um tubo fotomultiplicador, são usados para detectar a fluorescência. Os três detectores detectam fluorescência verde, laranja e vermelha.

As células são identificadas pela lógica de classificação aplicada a todos os cinco sinais do detector usando um computador.

Uma análise típica de sangue é realizada medindo-se primeiro o ângulo reto e a dispersão de luz direta das células. O gráfico de dispersão resultante é usado para identificar o portão de contagem, um conjunto de parâmetros usados para selecionar uma subpopulação de células para um estudo mais aprofundado. A área fechada do gráfico de dispersão é a porção na qual as células de interesse são encontradas.

Os parâmetros do portão são selecionados para que apenas esta subpopulação de células seja relatada em estudos de fluorescência subsequentes.

Partes da amostra são tratadas com dois anticorpos monoclonais, cada um específico para um antígeno de superfície celular. Cada anticorpo monoclonal é covalentemente ligado a um diferente.

Citometria de imagem

A citometria de imagem é geralmente usada para a análise multiparamétrica de células aderentes individuais e é usada para medir muitos dos mesmos parâmetros da citometria de fluxo. A citometria de imagem, no entanto, carrega a capacidade adicional de imagem tridimensional. “Análise de alto conteúdo” é um termo frequentemente aplicado à citometria de imagem no contexto de triagem de alto rendimento, enquanto “citometria tecidual” refere-se à aplicação dessas técnicas a células in situ. A citometria de imagem é geralmente realizada usando microscopia automatizada e processamento e análise de imagem computacional.

As tendências recentes em citometria de imagem incluem imagens de alta velocidade, imagens de super-resolução, citometria de imagem cinética e aprendizado de máquina para análise e interpretação de imagens.

A citometria de imagem é a forma mais antiga de citometria. Citômetros de imagem operam por imagem estática de um grande número de células usando microscopia óptica. Antes da análise, as células são comumente coradas para aumentar o contraste ou para detectar moléculas específicas, rotulando-as com fluorocromos. Tradicionalmente, as células são visualizadas dentro de um hemocitômetro para auxiliar na contagem manual.

Desde a introdução da câmera digital, em meados da década de 1990, o nível de automação dos citômetros de imagem aumentou constantemente.

Isso levou à disponibilidade comercial de citômetros de imagem automatizados, desde simples contadores de células até sofisticados sistemas de triagem de alto conteúdo.

Citometria de fluxo

Fonte: isac-net.org/en.wikipedia.org/www.encyclopedia.com